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如何的進行核酸提???
發布時間:2019-06-11   點擊次數:771次
   如何的進行核酸提???
  核酸提取的常見難點在于一些植物組織之所以比較難提取出高質量的RNA與這些植物組織中富含的一些成份有關,常見的有酚類化合物,多糖以及某些尚無法確定的次級代謝產物,另外還有就是富含較高活性的組織。在完整的細胞內,這些物質與核酸是分離的,一旦細胞破碎,這些物質就會與RNA相互作用。
  核酸提取方法:
  1. 迅速滅活內源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3個方法均可有效使內源RNA酶失活:
  1)用含離液(如胍鹽)的細胞裂解液收獲樣品,并立即勻漿。
  2)用液氮瞬間凍結樣品。值得特別注意的是:組織塊必須保證足夠小,在浸入液氮的瞬間就能凍結,以確保瞬間令RNA酶失活。
  3)立即將樣品置于無液氮RNA樣品儲存液中。它是一種水相、無毒的收集試劑,能立即穩定并保護完整、未凍結的組織和細胞樣品中的RNA。關鍵要點是組織樣品切片一定要夠?。?lt;0.5 cm),這樣才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。
  2. 使用正確的細胞或組織儲存條件
  在樣品用液氮瞬間凍結之后,應該儲存在-80°C,千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍,也會導致RNA的降解和損失。瞬間凍結的組織應該先在超低溫條件下先研磨成粉,然后置于裂解液中進行勻漿。
  4. 選擇好的RNA分離方法
  現有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡單也是安全的方法是柱式分離,如因為操作簡單,時間短,純度高而受到大家的喜愛,不需要DNA酶消化DNA,節省了時間,避免RNA的降解,從而提高了核酸提取產量;相對非柱式分離,去除蛋白及其他雜質干凈,提高了純度,對于細胞、組織、一般植物均非常適合。植物核酸提取比較難抉擇,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質、次生代謝物含量的影響,可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等)和通用植物RNA提取試劑盒(適合絕大多數植物提取,包括:蘋果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹、杉樹、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍、牽?;ǖ龋?;非常值得一提的是血液(包括血清、血漿、腦脊液、其他液體)核酸提取用TRIZOL和紅細胞裂解的方法效果都不好,紅細胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分,這個過程RNA很容易降解,推薦使用血液總RNA提取試劑盒。
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